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大鼠Actin-b檢測試劑盒之后我又用單抗包被,結(jié)果一樣:陰性、空白值好高。
1.包被:將三種單抗混合,1:1000,1:2000,1:4000......1:128000稀釋,做三個(gè)平行,4°過夜。
2.**天洗滌4次,每次3min,拍干。5%脫脂乳封閉,37°,2h。
3.洗滌4次,每次3min,拍干。加抗原(為純化好的原核表達(dá)蛋白)稀釋濃度為2微克/ml,同時(shí)設(shè)陰性對照(胎牛血清1:100稀釋),大鼠Actin-b檢測試劑盒空白對照(PBS溶液)。37°,1h。
4.洗滌4次,每次3min,拍干。加酶標(biāo)抗體(1:1000稀釋),37°,1h。
5.洗滌4次,每次3min,拍干。加TMB顯色,每孔100微升。37°,10min。
6.2M硫酸終止,
7.OD450讀數(shù)。
大鼠Actin-b檢測試劑盒結(jié)果,陽性值2.5,陰性對照和空白值很高可達(dá)到1.5。之后我又用細(xì)胞上清包被,其他和上面一樣,加酶標(biāo)抗體(1:1000稀釋),封閉用的是1%明膠和2%的BSA,2%的BSA封閉:陰性值1.8,陽性和空白值都在2.0以上。1%明膠封閉:陰性值1.0,陽性和空白值都在2.0以上。
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