小鼠胚胎肝細胞

貨號 KL-015

簡稱 BNL CL.2

細胞數(shù) 1×10⁶

規(guī)格 1ml/T25

價格 詢價

小鼠胚胎肝細胞注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。

詳細描述 Description

細胞介紹

在用鳥氨酸和苯丙氨酸代替精氨酸和酪氨酸的平板上選擇建立了這株細胞。檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

細胞特性

來源：小鼠肝

形態(tài)：上皮細胞樣

含量：>1x10⁶ 個/mL

污染：支原體、**、酵母和**檢測為陰性

規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細胞。收到細胞后，請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態(tài)，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后，再次檢查細胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，可進行細胞后續(xù)處理操作，按照以下方式進行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

小鼠胚胎肝細胞                     

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H，GIBCO，貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%，添加1% PS。

培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

細胞處理：

復蘇細胞：小鼠胚胎肝細胞將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1.  棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.  加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.  按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.  將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞凍存：小鼠胚胎肝細胞待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。