做ELISA試劑盒試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測(cè)時(shí)有幾個(gè)問(wèn)題需要注意 

 標(biāo)準(zhǔn)曲線如何繪制？實(shí)驗(yàn)室技術(shù)部分享，由于老師們對(duì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線有一定的異議，我司特別推出技術(shù)指導(dǎo)專題討論會(huì)，對(duì)于老師們所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線有什么問(wèn)題作出一一解答。對(duì)此技術(shù)總工對(duì)以下問(wèn)題作出詳細(xì)說(shuō)明： 
 提出做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測(cè)時(shí)有幾個(gè)問(wèn)題需要注意
1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來(lái)的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上 限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度*陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
3、*好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來(lái)說(shuō)，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是 0.999.
總結(jié)選擇什么方程去擬合
用于**檢測(cè)的所謂“標(biāo)準(zhǔn)曲線”其實(shí)稱為擬合曲線比較合適。**檢測(cè)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度如果和相應(yīng)的吸光度（OD）值如 果能夠呈現(xiàn)直線關(guān)系當(dāng)然是*理想的了，這時(shí)可以通過(guò)EXELL等方便的獲得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。但我們做**檢測(cè)很少有時(shí)候能夠有這么理想 的情況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值往往是"S"型的曲線關(guān)系，這時(shí)就不能用直線擬合的方式了，而對(duì)擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了。
關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對(duì)數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合，但都只適用于曲線的一部分， 有的適用于前半段，有的適用于后半段，有的適用于中間一段，而Logistic曲線則對(duì)曲線的全部都有較好的適用性。當(dāng)然，如果用于定量，還是在中間一段 較好。這些方法雖然沒(méi)有一種方法可以通用，但也都可以用。關(guān)鍵在于你的標(biāo)準(zhǔn)曲線做到了S形的哪一部分，你想檢測(cè)的樣品濃度在曲線的哪一部分。在S曲線的低 濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部分可以用直線方程，中間部分可用對(duì)數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。
目前國(guó)際上*流行的**檢測(cè)擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合”，用這種擬合方式往往能夠比較**的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較正確的獲 得樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度值。
其實(shí)，在一個(gè)長(zhǎng)的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想。但并不是說(shuō)它就是萬(wàn)能的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它很多生物學(xué)反應(yīng)都是S形 曲線，也都可以用Logistic曲線擬合。但建模型是一回事，而用它來(lái)定量是另一回事。如果用來(lái)定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩端的 平坦部分計(jì)算誤差會(huì)大，有時(shí)甚至?xí)艽蟆?br> 國(guó)內(nèi)外的定量試劑盒往往嚴(yán)格規(guī)定了較窄的使用濃度范圍，實(shí)際上是一種偷懶得做法，為了避免叫你選擇不同類型的標(biāo)準(zhǔn)公式。