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原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法
日期：2024-08-31 00:32
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摘要：
原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。原代細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中，也可能產(chǎn)生基因突變而形成無限傳代的細(xì)胞株，傳代次數(shù)越多，就越有可能變成細(xì)胞株（基因缺陷型），因此科學(xué)界也通常把**代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)步驟為：
1）將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出并**除去存留在組織上的**、病毒、**等污染源，這些污染源將會(huì)所需培養(yǎng)的原代細(xì)胞凋亡、停止生長(zhǎng)和繁殖直至死亡，因此整個(gè)原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中**在無菌狀態(tài)下進(jìn)行。
2）將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘，通常在37C水浴里進(jìn)行，而蛋白酶的選定取決于器官組織和所需細(xì)胞的類型，比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能分解而出單個(gè)細(xì)胞，但是對(duì)于腦組織和乳腺等軟組織，就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶， 以免損傷分散出來的單個(gè)細(xì)胞。
3）將分散而成的單個(gè)細(xì)胞置于合適的培養(yǎng)基（含有特殊細(xì)胞生長(zhǎng)因子、添加劑以及血清， 或者無血清培養(yǎng)基）中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖， 整個(gè)過程都是在無菌情況下操作。
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