一、Easysep? 產(chǎn)品是如何工作的？ 

Q：Easysep?產(chǎn)品能夠用于正選或者是負(fù)選實驗嗎？

A：是的。Easysep?試劑盒能夠用于去除不需要的細(xì)胞的負(fù)選或者是富集想要的細(xì)胞的正選方法。**試劑盒是能夠用于移除特定標(biāo)記的細(xì)胞（比如：GlyA）。

Q：Easysep?分選的原理是什么？

A: 使用抗體復(fù)合物和葡聚糖包被的納米磁珠可在短時間內(nèi)分選細(xì)胞。四聚體抗體復(fù)合物（ Tetrameric  Antibody  Complexes， TAC )可將目標(biāo)細(xì)胞和磁珠聯(lián)結(jié)起來。當(dāng)樣本置于EasySep?磁極內(nèi)時，標(biāo)記的細(xì)胞會被吸附到試管壁上。被磁珠標(biāo)記的細(xì)胞（正選組分）仍將保留在試管中，而未經(jīng)標(biāo)記的細(xì)胞（負(fù)選組分）則被倒入新的試管中。

Q：我需要使用哪一種規(guī)格的分離柱？

A:  EasySep? 產(chǎn)品不需要使用分選柱子。快捷的無柱分選！

Q: 如何分析收集到的樣本細(xì)胞的純度？

A: 每個EasySep?試劑盒里都提供了詳細(xì)的產(chǎn)品說明書，并且包括了詳細(xì)的流式分析的純度檢測結(jié)果。

Q：EasySep?分選是否能夠自動化？

A: 是的。RoboSep?系列是能夠完全實現(xiàn)細(xì)胞的自動化分選，自動進(jìn)行EasySep?細(xì)胞標(biāo)記以及分選的全過程。

Q: 樣本初始細(xì)胞較少時能夠使用EasySep?進(jìn)行分選嗎？

A: 可以，我們推薦使用細(xì)胞濃度2X108 cells/ml，*小體積為100 ul。即100 ul溶液中包含2X107個細(xì)胞。

二、EASYSEP? 磁珠相關(guān)

Q: EasySep?磁珠與流式儀器是否兼容？

A: EasySep?磁珠能夠與流式儀器兼容，因為EasySep?磁珠的大小是納米級別的，約比正常的商業(yè)用途上用于無柱分選系統(tǒng)中的磁珠還小5000倍。

Q: 使用EasySep?磁珠用于富集細(xì)胞時，是否能夠?qū)⒋胖榕c細(xì)胞進(jìn)行解離？

A: 不需要進(jìn)行解離，因為EasySep?的磁珠是很小的，它并不影響細(xì)胞下游的應(yīng)用。

Q: EasySep?磁珠結(jié)合影響細(xì)胞嗎？正選的細(xì)胞結(jié)合磁珠是否會有功能學(xué)的影響？

A: 已經(jīng)有大量的文獻(xiàn)報道，使用EasySep?正選的試劑盒分離的細(xì)胞能夠用于功能學(xué)的研究（細(xì)胞培養(yǎng)等）。我們也經(jīng)過驗證正選后與EasySep?的磁珠結(jié)合的細(xì)胞并不影響細(xì)胞的功能的改變。

如果擔(dān)心細(xì)胞結(jié)合磁珠會影響實驗結(jié)果，我們建議可以使用負(fù)選的方法進(jìn)行細(xì)胞的分選。EasySep?磁珠負(fù)選的方法能夠分選出純度較高的未結(jié)合磁珠的細(xì)胞，或者使用RosstteSepTM能夠從全血中分離未結(jié)合的細(xì)胞，而不涉及到磁珠問題。

三、EASYSEP? 實驗過程是可以改變的嗎？

Q: 我能夠改變細(xì)胞在磁極中吸附的時間嗎？

A:可以的。但是，這樣很有可能會影響試劑盒分選的*佳結(jié)果。試劑盒里提供的操作步驟是已經(jīng)優(yōu)化的*佳條件，可以保證分離后細(xì)胞的純度、得率以及完成實驗時所需的*短的時間。

Q：正選的時候，可以進(jìn)行3次的磁珠吸附的過程嗎 ？

A: 可以的，進(jìn)行多次的磁珠吸附可以提高細(xì)胞的純度，但是有可能會導(dǎo)致細(xì)胞的得率降低。

四、RosetteSep^TM 產(chǎn)品是如何工作的？ 

Q: 什么是RosetteSep??

A: RosetteSep?是可以直接從人全血中快速分離純化的細(xì)胞，而不需要特定的分離柱和磁極。

Q：ROSETTESEP?分離的原理是什么？

A：從全血中分離**細(xì)胞，只需使用適當(dāng)?shù)腞osetteSep?抗體混合物與樣品孵育，然后使用SepMate?或標(biāo)準(zhǔn)密度梯度離心進(jìn)行分離。RosetteSep?將不需要的細(xì)胞與紅血細(xì)胞交聯(lián)，形成**玫瑰花結(jié)結(jié)構(gòu)，在離心過程中，這些**玫瑰花結(jié)會被離心到管底而被除去（圖1）。

圖1. 加入RosetteSep?抗體混合物后，進(jìn)行密度梯度離心前的血液樣本圖例

在血漿和密度梯度離心液之間的界面中留下高純度的目的細(xì)胞。如果使用SepMate?，只需將純化的細(xì)胞倒入新的試管即可。若用密度梯度分離液，需要從血漿和密度梯度離心液的界面收獲目的細(xì)胞。

Q：細(xì)胞收集的影響因素是什么？

A: 所使用的實驗材料的溫度會影響細(xì)胞的收集。所有的使用材料在進(jìn)行分離前都必須平衡至室溫（包括樣本，密度離心介質(zhì)，PBS，離心機等）。分離層也會影響細(xì)胞的收集，要小心地將樣本鋪在密度離心介質(zhì)上層，盡量不要打破分離層。確定收集到的細(xì)胞沒有包含紅細(xì)胞，若收集到少量的密度離心介質(zhì)是沒有關(guān)系的。

Q：哪些細(xì)胞樣本可以用于RosetteSep?？

A: RosetteSep?可以用于人白細(xì)胞去除、骨髓或者是白膜層的收集，細(xì)胞的密度不要超過5X107 cells/ml(必要的話可以進(jìn)行稀釋)；有核的細(xì)胞與紅細(xì)胞的比率約為1:20，所以必要的時候可以先對紅細(xì)胞進(jìn)行裂解。

Q: RosetteSep?是否可以用于凍存的細(xì)胞或者培養(yǎng)的細(xì)胞分離？

A:可以的。細(xì)胞可以用包含2%FBS的PBS重懸，細(xì)胞的密度為2-5x107 cells/ml。

Q: RosetteSep?是否可以用于凍存過的全血的細(xì)胞分離？

A：可以的，有時候凍存過的全血包含著未成熟的有核的紅細(xì)胞，這種細(xì)胞比成熟的紅細(xì)胞具有更低的密度，但是未成熟的紅細(xì)胞并不會通過Ficoll?而分離，從而導(dǎo)致更高的RBC污染，相比外周血分選。

Q: RosetteSep?是否可以用于小鼠細(xì)胞的分離？

A： 不可以，但是我們有其他的產(chǎn)品如EasySep?系列，基于磁珠連接細(xì)胞的原理的產(chǎn)品能夠用于小鼠或者是其他非人源細(xì)胞的分離。

五、樣本的抗凝處理相關(guān)

Q: RosetteSep?需要使用什么抗凝劑？

A: 人的外周血必須使用肝素化的抗凝管進(jìn)行收集；凍存的血液必須使用ACD。

Q：使用RosetteSep?前需要將抗凝劑清洗掉嗎？

A:不需要，抗體的混合物可以直接加入到樣本細(xì)胞溶液中。