產品名稱：狗血小板活化因子檢測試劑盒

英文名稱：PAKL Elisa Kit

檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

保存溫度：短期4℃/長期-20℃保存

酶標包被板：96孔/48孔（48T酶標包被板是96T一半）

性 狀：盒裝液體

狗血小板活化因子檢測試劑盒方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法：

1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 狗血小板活化因子檢測試劑盒加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

狗血小板活化因子檢測試劑盒方法二 用于檢測未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

                                   ↓

加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）

                                   ↓

于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標**抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,*后一遍用DDW洗滌。

                                   ↓

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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