Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學感受態(tài)細胞產(chǎn)品描述
Stbl2是采用大腸桿菌JM109菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，適合于多種插入片段的化學轉化。具有以下特點：
① 更適于不穩(wěn)定插入片段（正向重復序列，逆轉錄病毒序列等）的克??；
② 更適于克隆慢病毒載體、甲基化的基因組序列；
③ 利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質粒 DNA 的提取；
④ 不存在lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。
本品使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達109cfu/μg。
本品基因型：F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 。
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學感受態(tài)細胞產(chǎn)品組分
運輸與保存方法
干冰運輸。
Stbl2 感受態(tài)細胞-80℃保存，pUC19質粒-20℃保存。有效期半年。
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學感受態(tài)細胞注意事項
1）感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2）整個轉化操作，嚴格根據(jù)相應溫度及無菌條件要求進行。
3）為確保*高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
4）為防止轉化不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，*低化實驗可能遇到的風險。
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化學感受態(tài)細胞使用方法
1）取100 μl感受態(tài)細胞置于冰浴中融化。
【注】：一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用，應注意所用的DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
2）向100 μl感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置25min。
3）置于42℃水浴中熱激45 s，然后快速將管轉移到冰浴中，冷卻2-3min，該過程不要搖動離心管，否則會降低轉化效率。
4）向離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含***），混勻后置于30℃搖床振蕩培養(yǎng)90min（225rpm），目的是促使菌體復蘇。
【注】：當質粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率，若轉化Control pUC19 計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60min。
5）將上述復蘇的菌液于5000rpm離心1min，留取100μl左右上清輕輕混勻菌液并涂布到含相應***的SOC培養(yǎng)基上。
6）將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
【注】：若轉化control pUC19 計算轉化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜。
