人惡性黑色素瘤細胞

貨號 KL-020

簡稱 A-375

細胞數(shù) 1×10⁶

規(guī)格 1ml/T25

價格 詢價

人惡性黑色素瘤細胞注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。

詳細描述 Description

細胞介紹

A375源自一位54歲女性，是Giard DJ等人建立的一系列細胞株中的一株。該細胞可在**抑制小鼠上成瘤，在瓊脂上形成克隆。

人惡性黑色素瘤細胞細胞特性

來源：人黑色素瘤

形態(tài)：上皮樣細胞

含量：>1x10⁶ 個/mL

污染：支原體、**、酵母和**檢測為陰性

規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞培養(yǎng)步驟：

一、人惡性黑色素瘤細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；上等胎牛血清，10%。

2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3、凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二、人惡性黑色素瘤細胞細胞處理：

1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢查細胞密度。

2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1）棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3）按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4）將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。