小鼠畸胎瘤細胞

貨號 KL-014

簡稱 P19

細胞數(shù) 1×10⁶

規(guī)格 1ml/T25

價格 詢價

小鼠畸胎瘤細胞注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。

詳細描述 Description

細胞介紹

加拿大渥太華大學(xué)的Mc Burney 等在1982 年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的 , 是一種能夠在體外培養(yǎng)的多能干細胞, P19 細胞團經(jīng)RA 誘導(dǎo)可分化成神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞和纖維母細胞; 而經(jīng)二甲基亞砜(DM SO ) 誘導(dǎo)則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19細胞向神經(jīng)元分化的過程中，神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達模式基本模擬了正常小鼠神經(jīng)發(fā)育過程, 因此, P19 目前被用作一個研究神經(jīng)發(fā)育的體外模型。P19 細胞作為研究神經(jīng)分化機制的模型, 顯著區(qū)別于其他細胞系的四大特點是: ①它具有正常小鼠的二倍體核型, 細胞分裂快, 可在體外迅速大量擴增, 多次傳代也不喪失其分化能力。②P19 細胞具有多種分化潛力, 不同誘導(dǎo)條件下可定向分化成不同類型的細胞, 種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細胞。③根據(jù)P19 細胞誘導(dǎo)分化分階段進行的特點, 能將神經(jīng)分化的早期機制與參與突起延伸的機制分開研究。④該細胞易于轉(zhuǎn)染, 且轉(zhuǎn)染后仍能正常分化, 適于進行細胞基因研究。通過轉(zhuǎn)染正?；蛲蛔兊哪康幕? 增強或抑制它們的表達水平可用于研究這些基因在神經(jīng)分化中的作用。另外, 利用反義RNA 阻斷內(nèi)源蛋白的表達, 可用來觀察這些蛋白在神經(jīng)分化中的作用。

(references:1.張金平等. 全反式維甲酸體外誘導(dǎo)P19細胞向心肌方向分化.[J]中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志.2012.1

 小鼠畸胎瘤細胞                     2.梅宇欽等. 建立經(jīng)優(yōu)化的促P19鼠胚胎癌細胞神經(jīng)分化模型.浙江大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）2012.04)

細胞特性

1）  來源：胚胎；畸胎癌

2）  形態(tài)：上皮細胞樣

3）  含量：>1x10⁶ 個/mL

4）  污染：支原體、**、酵母和**檢測為陰性

5）  規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有上等胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途：僅供科研使用。

小鼠畸胎瘤細胞                     

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備MEMα培養(yǎng)基(MEMα+培養(yǎng)基(GIBCO,貨號11900024，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇 43.2mg/L, 葉酸 8.82mg/L,β-巰基乙醇 7.8mg/L)，90%；BCS，7.5%；胎牛血清，2.5%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.      棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.      加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.      按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.      將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：小鼠畸胎瘤細胞待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。