大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞
貨號(hào) KL-002
簡(jiǎn)稱 C6
細(xì)胞數(shù) 1×106
規(guī)格 1ml/T25
價(jià)格 詢價(jià)
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物**臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要**后方能丟棄。
詳細(xì)描述 Description
細(xì)胞介紹
膠質(zhì)細(xì)胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea誘導(dǎo)的大鼠膠質(zhì)瘤克隆,并經(jīng)過(guò)一系列的體外培養(yǎng)和動(dòng)物傳代交替后建成的。當(dāng)細(xì)胞從低密度生長(zhǎng)到滿瓶時(shí),S-100產(chǎn)量增加10倍。
細(xì)胞特性
來(lái)源:大鼠,膠質(zhì)瘤
形態(tài):成纖維細(xì)胞,貼壁生長(zhǎng)
含量:>1x106 個(gè)/mL
污染:支原體、**、酵母和**檢測(cè)為陰性
規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,請(qǐng)先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過(guò)夜后,再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好,可按照以下細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
準(zhǔn)備F12K培養(yǎng)基(F12K,SIGMA,貨號(hào)N3520,添加NaHCO3 2.5g/L),82.5%;馬血清,15%;上等胎牛血清,2.5%。
培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
細(xì)胞處理:
復(fù)蘇細(xì)胞:大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。**天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。